【流式细胞术实验步骤】流式细胞术（Flow Cytometry）是一种用于分析和分选单个细胞或颗粒的技术，广泛应用于免疫学、肿瘤学、细胞生物学等领域。该技术通过将细胞悬液注入流动室中，并利用激光照射，检测细胞的散射光和荧光信号，从而对细胞进行多参数分析。
以下是对流式细胞术实验步骤的总结，便于研究人员快速掌握实验流程。
一、实验步骤总结
| 步骤 | 实验内容 | 说明 |
| 1 | 细胞制备 | 收集目标细胞，如外周血、组织细胞等，进行洗涤和重悬，确保细胞单分散性。 |
| 2 | 固定与透膜（如需） | 根据实验目的，可能需要使用固定剂（如4%多聚甲醛）固定细胞，并加入透膜剂（如Triton X-100）以增强抗体渗透。 |
| 3 | 抗体标记 | 加入特异性荧光标记的抗体，孵育一定时间（通常为30分钟至1小时），使抗体结合到目标抗原上。 |
| 4 | 洗涤 | 用PBS或缓冲液洗去未结合的抗体，减少背景干扰。 |
| 5 | 重悬与过滤 | 将细胞重悬于适当体积的缓冲液中，并通过20–40 μm滤网过滤，避免堵塞仪器。 |
| 6 | 上机检测 | 将样品放入流式细胞仪中，设置合适的电压和补偿，进行数据采集。 |
| 7 | 数据分析 | 使用软件（如FCS Express、FlowJo）对获得的数据进行分析，包括门控、双色/多色分析、细胞周期等。 |
二、注意事项
- 细胞活性：实验前应确保细胞活力良好，避免死细胞影响结果。
- 抗体选择：根据实验目的选择合适的荧光染料和抗体组合，注意光谱重叠问题。
- 补偿设置：在多色实验中，需正确设置补偿矩阵，避免荧光信号交叉干扰。
- 仪器校准：每次实验前应对流式细胞仪进行校准，确保数据准确性。
- 样本保存：若不立即检测，可将细胞暂时保存于4℃，但不宜过久。
三、应用方向
流式细胞术可用于：
- 细胞表面标志物分析
- 细胞周期与凋亡检测
- 胞内因子表达分析
- 细胞分选（FACS）
- 免疫表型鉴定
通过以上步骤，研究人员可以系统地完成一次完整的流式细胞术实验，为后续数据分析和研究提供可靠依据。
